附件：胱抑素C測定試劑（膠乳透射免疫比濁法）注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2017年第213號）.doc

胱抑素C測定試劑（膠乳透射免疫比濁法）
注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)技術(shù)審評部門對胱抑素C測定試劑（膠乳透射免疫比濁法）的技術(shù)審評工作，同時(shí)也為注冊申請人注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫提供參考。

本指導(dǎo)原則是對胱抑素C測定試劑（膠乳透射免疫比濁法）的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

胱抑素C測定試劑（膠乳透射免疫比濁法）是指基于透射免疫比濁法原理，利用半自動(dòng)生化分析儀、全自動(dòng)生化分析儀對人血清、血漿中的胱抑素C進(jìn)行體外定量分析的試劑。

目前胱抑素C含量的測定方法主要是基于抗原抗體反應(yīng)的免疫方法，如膠乳免疫比濁法、膠體金免疫比色法、單向免疫擴(kuò)散法、酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫測定法、熒光免疫測定法等，免疫比濁法可分為透射免疫比濁法和散射免疫比濁法。其中透射免疫比濁法可適用于半自動(dòng)生化分析儀、全自動(dòng)生化分析儀，散射免疫比濁法需特定蛋白分析儀。

從方法學(xué)上講，本指導(dǎo)原則僅適用于膠乳透射免疫比濁法,不適用于散射免疫比濁法。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），胱抑素C測定試劑（免疫比濁法）管理類別為二類，分類代號為6840。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價(jià)、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預(yù)期用途及輔助診斷的臨床適應(yīng)證背景情況 

（1）胱抑素C的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能、在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

胱抑素C（Cystatin C, CysC）是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ—微量蛋白及γ—后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，分子量為13.3KD，由122個(gè)氨基酸殘基組成，可由機(jī)體所有有核細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定。循環(huán)血液中的Cys C能自由透過腎小球，在近曲小管幾乎全部被上皮細(xì)胞攝取并分解，尿中僅微量排出。Cys C水平不受性別、年齡、飲食等因素的影響，是一種反映腎小球?yàn)V過率（GFR）變化的理想內(nèi)源性標(biāo)志物。

當(dāng)腎功能受損時(shí)，Cys C在血液中的濃度隨腎小球?yàn)V過率變化而變化。腎衰時(shí)，腎小球?yàn)V過率下降，Cys C在血液中濃度可增加數(shù)倍甚至十?dāng)?shù)倍。

（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，如臨床相關(guān)疾病的發(fā)生、實(shí)驗(yàn)室診斷方法等。

腎小球?yàn)V過率（GFR）的評估在腎功能的監(jiān)測方面具有重要意義。

注：若注冊申報(bào)產(chǎn)品聲稱臨床意義超出此內(nèi)容范圍，應(yīng)提供相關(guān)文獻(xiàn)或臨床研究依據(jù)。

CysC分子量較小，其測定方法主要基于免疫反應(yīng)原理。隨著CysC在臨床上的應(yīng)用，檢測它的方法也越來越多，按照原理大體上可分為二類：一類是非均相法如單向免疫擴(kuò)散法（RID）、放射免疫測定法（RIA）、熒光免疫測定法（FIA）、酶聯(lián)免疫測定法（ELISA）；另一類是均相法如顆粒計(jì)數(shù)免疫測定法，顆粒增強(qiáng)透射免疫比濁法（PETIA），顆粒增強(qiáng)散射免疫比濁法（PENIT）。非均相法難于自動(dòng)化，限制了CysC的臨床推廣應(yīng)用，膠乳免疫測定是一種均相測定方法，在膠乳顆粒上包被抗體，與抗原結(jié)合時(shí)顆粒發(fā)生凝集，此方法易于自動(dòng)化，已被廣泛應(yīng)用于臨床。

2.產(chǎn)品描述

包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理、主要原材料的來源、質(zhì)量控制及制備方法、主要生產(chǎn)工藝過程及關(guān)鍵控制點(diǎn)，質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的制備方法及溯源情況。

3.有關(guān)生物安全性方面的說明

如果體外診斷試劑中的主要原材料采用各種動(dòng)物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，為保證產(chǎn)品在運(yùn)輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，研究者應(yīng)提供上述原材料有關(guān)生物安全性的說明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)

5.參考文獻(xiàn)

6.其他

包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證研究資料；質(zhì)控品（如產(chǎn)品包含）、校準(zhǔn)品（如產(chǎn)品包含）的原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料；校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

產(chǎn)品的主要生產(chǎn)工藝可以用流程圖表示，明確關(guān)鍵工序和特殊工序，并簡單說明控制方法。確定反應(yīng)溫度、時(shí)間、緩沖體系等的研究資料、確定樣本和試劑（盒）組分加樣量的研究資料。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段對三批試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評估時(shí)應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評價(jià)，評估整個(gè)系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。

性能評估應(yīng)至少包括空白吸光度、分析靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、線性、分析特異性（抗干擾能力）等。

1.試劑空白吸光度

用生理鹽水作為樣本重復(fù)測定2次，記錄試劑參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點(diǎn)主波長下的吸光度值（A），結(jié)果均值應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。

2.分析靈敏度

測定已知濃度在（1.00±0.10）mg/L的樣本，記錄試劑規(guī)定參數(shù)的吸光度差值。換算為1.00mg/L的胱抑素C的吸光度差值，結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。

3.準(zhǔn)確度

建議按如下優(yōu)先順序，同時(shí)結(jié)合申請人實(shí)際情況，采用如下方法之一對試劑準(zhǔn)確度進(jìn)行評價(jià)。

（1）相對偏差

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的試劑線性區(qū)間，將可用于評價(jià)常規(guī)方法的參考物質(zhì)作為樣本，按照待測試劑說明書的步驟進(jìn)行檢測，每個(gè)樣品重復(fù)測定3次，測試結(jié)果記為（Mi），按公式（1）分別計(jì)算相對偏差（Bi），如果3次結(jié)果都符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有2次結(jié)果符合，1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（1）計(jì)算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求，即判為合格，準(zhǔn)確度符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。 

Bi=（Mi-T）/T×100%                     （1）        

式中： 

Bi—相對偏差； 

Mi—測量濃度； 

T—參考物質(zhì)標(biāo)示值。 

（2）回收試驗(yàn)

在人源樣品中加入一定體積由具有溯源性的參考物質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液體積與人源性樣品體積比應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后樣品總濃度必須在試劑檢測線性區(qū)間內(nèi)）或純品，每個(gè)濃度重復(fù)檢測3次，按公式（2）計(jì)算回收率，結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。

R=[C×（V0+V）－C0×V0）] / （V×CS）×100%               （2）

式中：

R —回收率；

V —加入標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；

V0 —人源樣品的體積；

C —人源樣品加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后的檢測濃度；

C0 —人源樣品的檢測濃度；

Cs —標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

（3）方法學(xué)比對

參照EP9—A2的方法，用不少于40個(gè)在檢測濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，以生產(chǎn)企業(yè)指定的已上市分析系統(tǒng)作為比對方法，每份樣品按待測試劑操作方法及比對方法分別檢測。用線性回歸方法計(jì)算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（r）及醫(yī)學(xué)參考水平的相對偏差，結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。

在實(shí)施方法學(xué)比對前，確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或技術(shù)要求后方可進(jìn)行比對試驗(yàn)。方法學(xué)比對時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

4.精密度

測量精密度的評估方法包括重復(fù)性和批間差試驗(yàn)，應(yīng)至少包括兩個(gè)濃度水平的樣本，其中一個(gè)樣本濃度應(yīng)在（1.00±0.10）mg/L樣本范圍內(nèi)，另一個(gè)樣本應(yīng)為異常高值樣本。

（1）重復(fù)性 

在重復(fù)性條件下，對不同濃度的樣品分別重復(fù)測定10次，計(jì)算10次測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV），結(jié)果均應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。 

式中： 

CV—變異系數(shù)； 

SD—10次測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差； 

x—10次測量結(jié)果的平均值。 

（2）批間差 

分別用三個(gè)不同批號試劑，對不同濃度的樣品，分別重復(fù)測定3次，計(jì)算每個(gè)濃度樣本每批號3次測量結(jié)果的平均值（i，i=1、2、3），根據(jù)公式（4）、公式（5）計(jì)算批間相對極差（R），結(jié)果均應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求相應(yīng)性能指標(biāo)的要求。 

式中： 

5.線性

取接近測定范圍上限的高值（H）和接近下限的低值（L）樣本各一份，混合成至少6個(gè)稀釋濃度的樣本（xi），充分混勻，防止蒸發(fā)或其他改變。用試劑（盒）分別測試各稀釋濃度3次，然后分別計(jì)算每個(gè)稀釋濃度檢測結(jié)果的均值（yi），以xi為自變量，以yi為因變量求出線性回歸方程，按公式（6）計(jì)算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）；同時(shí)將xi代入線性回歸方程，計(jì)算yi的估計(jì)值（yie），根據(jù)公式（7）和（8）計(jì)算線性絕對偏差或相對偏差（Ri），結(jié)果均應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。

建立試劑線性所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測的樣本相似，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。

6.分析特異性

（1）交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體及嗜異性抗體等的驗(yàn)證情況。

（2）干擾物質(zhì)：可采用回收試驗(yàn)對樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如溶血、高脂、黃疸、類風(fēng)濕因子、抗凝劑等干擾因子的研究，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重的模糊表述。

（3）藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。

7.其他需注意問題

（1）申請人可建立自己的企業(yè)參考品，參考品來源應(yīng)穩(wěn)定，并明確建立過程。

（2）如注冊申請中包括不同適用機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行上述項(xiàng)目評估的試驗(yàn)資料及總結(jié)。

如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行的上述項(xiàng)目評估的試驗(yàn)資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

分析性能評估報(bào)告應(yīng)明確所用儀器設(shè)備型號、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品等的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)名稱、生產(chǎn)批號等信息。

（3）校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品定值

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計(jì)算記錄。提供質(zhì)控品在所有適用機(jī)型上進(jìn)行的定值資料。

（4）不同樣本類型研究

如產(chǎn)品聲稱的樣本類型包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進(jìn)行相關(guān)性研究以確認(rèn)二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。對于血漿樣本，申請人應(yīng)對不同的抗凝劑進(jìn)行研究以確認(rèn)最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結(jié)果。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)明確研究采用的樣本來源、詳細(xì)的試驗(yàn)資料、統(tǒng)計(jì)方法等，參考值范圍可參考文獻(xiàn)資料，但應(yīng)當(dāng)明確說明出處，并進(jìn)行轉(zhuǎn)移驗(yàn)證。驗(yàn)證樣本數(shù)量應(yīng)不低于120例。建議參考CLSI/NCCLS C28-A2。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者通常包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（如有）、運(yùn)輸穩(wěn)定性等。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論，對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的性能檢測研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床評價(jià)資料

臨床評價(jià)資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）要求，同時(shí)資料的形式應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床評價(jià)資料有關(guān)的規(guī)定。

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布第三批免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)醫(yī)療器械目錄的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第170號），胱抑素C測定試劑可免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)，申請人可依照《總局關(guān)于發(fā)布免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評價(jià)資料基本要求（試行）的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）開展評價(jià)。申請人如無法按要求對“目錄”中產(chǎn)品進(jìn)行臨床評價(jià)，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

下面僅對臨床試驗(yàn)中的基本問題進(jìn)行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能相近的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品與之進(jìn)行對比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

至少應(yīng)當(dāng)選定不少于2家（含2家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，評價(jià)試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的對比試劑及所用機(jī)型應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

試驗(yàn)方案中還應(yīng)明確兩種試劑檢測結(jié)果不一致的判定依據(jù)，以及結(jié)果不一致樣本復(fù)核的方法。

4.研究對象選擇

申請人或臨床研究者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品臨床預(yù)期用途以及與該產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床試驗(yàn)的樣本量和樣本分布，在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本量要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)樣本量和樣本分布應(yīng)相對均衡?？傮w樣本數(shù)不少于200例，建議異常值樣本數(shù)不少于總體樣本數(shù)的30%。

應(yīng)明確樣本類型、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿樣本應(yīng)明確抗凝劑的要求。

樣本中待測物濃度應(yīng)能覆蓋評價(jià)試劑聲稱的線性范圍，且盡可能均勻分布。

如果評價(jià)試劑同時(shí)適用于血清或血漿樣本類型，可完成一個(gè)樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時(shí)可選至少100例血清或血漿同源樣本進(jìn)行比對研究。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如相關(guān)分析、線性回歸、等效性檢驗(yàn)、Bland-Altman法、偏差分析等。對于對比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法檢測結(jié)果的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在臨床研究方案中應(yīng)明確評價(jià)試劑與對比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或決定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。

6.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

6.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

6.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

6.1.2納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

6.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

6.2具體的臨床試驗(yàn)情況

6.2.1評價(jià)試劑和對比試劑的名稱、批號、有效期及所用機(jī)型等信息。

6.2.2質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對檢測精密度、準(zhǔn)確度抽查結(jié)果評估。

6.2.3具體試驗(yàn)過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。

6.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

6.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

6.3.2定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是評價(jià)試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是決定系數(shù)（通常免疫項(xiàng)目要求R2≥0.95），同時(shí)應(yīng)給出b的95%置信區(qū)間。

建議給出評價(jià)試劑與對比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）及比值（相對偏倚/偏差）散點(diǎn)圖并作出95%置信區(qū)間分析。

6.4討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗(yàn)結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）生產(chǎn)及自檢記錄

提供連續(xù)三批產(chǎn)品生產(chǎn)及自檢記錄的復(fù)印件。

（九）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析、風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)和相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（十）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）以及《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。該產(chǎn)品目前已有相應(yīng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，企業(yè)產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)至少不低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。如產(chǎn)品含有配套校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，還應(yīng)包含對校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的相關(guān)要求。

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)包含產(chǎn)品名稱、產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分說明、性能指標(biāo)、檢驗(yàn)方法和產(chǎn)品技術(shù)要求編號。產(chǎn)品名稱、產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分說明和性能指標(biāo)的內(nèi)容應(yīng)與其他注冊資料中的相應(yīng)內(nèi)容保持一致。檢驗(yàn)方法應(yīng)優(yōu)先考慮采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，對于尚無公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，需與產(chǎn)品性能研究資料的內(nèi)容一致，并保證該方法具有可重現(xiàn)性和可操作性。

性能研究及產(chǎn)品技術(shù)要求研究適用的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)清單見表1。

注：上述標(biāo)準(zhǔn)未標(biāo)注年代號，申請人應(yīng)參照最新版本；如有其他新的適用國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)參照。

（十一）產(chǎn)品注冊檢驗(yàn)報(bào)告

首次申請注冊的胱抑素C測定試劑應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行產(chǎn)品的注冊檢驗(yàn)。

（十二）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)使用人員正確操作、臨床醫(yī)生準(zhǔn)確理解和合理應(yīng)用試驗(yàn)結(jié)果的重要技術(shù)性文件。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014第17號）的要求。下面對胱抑素C測定試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

（1）試劑名稱

試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：胱抑素C測定試劑（免疫比濁法）。

（2）英文名稱（如有）應(yīng)當(dāng)正確、完整，不宜只寫縮寫。

2.【包裝規(guī)格】

（1）包裝規(guī)格應(yīng)明確裝量（如××mL；××人份）。

（2）與產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格一致。

3.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）說明試劑用于檢測人體血清或/和血漿樣本中胱抑素C的含量。

（2）胱抑素C含量異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。

作為支持性資料，申請人應(yīng)提供由臨床循證研究、教科書、臨床專著、核心期刊文獻(xiàn)或英文SCI文獻(xiàn)等有關(guān)臨床適應(yīng)證背景的資料。

4.【檢驗(yàn)原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗(yàn)的原理、方法，必要時(shí)可采取圖示方法表示。

例如：利用抗原抗體反應(yīng)，人血清或血漿中胱抑素C與其相應(yīng)抗體致敏的膠乳顆粒在液相中相遇發(fā)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生凝集，引起濁度上升。通過測定特定波長吸光度變化值，與同樣處理的校準(zhǔn)品比較，即可計(jì)算出樣本中胱抑素C的濃度。

5.【主要組成成分】

（1）對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗(yàn)必需的試劑組分，說明書中應(yīng)列出此類試劑的名稱、醫(yī)療器械注冊證號或備案證號、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。

（2）對于校準(zhǔn)品（若配有）：注明校準(zhǔn)品的定值及其溯源性，溯源性資料應(yīng)寫明溯源的最高級別（應(yīng)包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物質(zhì)的發(fā)布單位及編號）。

6.【儲存條件及有效期】

（1）對試劑的效期穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（如有）、開瓶穩(wěn)定性等信息作詳細(xì)介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。

（2）不同組分保存條件及有效期不同時(shí)，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準(zhǔn)。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。 

7.【適用儀器】

（1）說明可適用的儀器，應(yīng)寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器，并且與分析性能評估資料一致。

（2）如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機(jī)型，應(yīng)同時(shí)明確適用機(jī)型。

8.【樣本要求】

重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期）和運(yùn)輸條件等?？煞癫捎酶嗡乜鼓獫{、檸檬酸鈉抗凝血漿、EDTA抗凝血漿。以上描述皆應(yīng)與研究資料一致。

如樣本濃度超出線性范圍后，應(yīng)明確最大可稀釋倍數(shù)，并提供相應(yīng)的支持性研究資料。

9.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

（1）試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

（2）試驗(yàn)條件：溫度、時(shí)間、測定主/副波長、比色杯光徑、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時(shí)間等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)。

（3）校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。

（4）質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控頻率等。 

（5）檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算：應(yīng)明確檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算方法。

10.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明常用樣本類型及反應(yīng)方式的正常參考區(qū)間，并說明參考區(qū)間確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

說明可能對檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，明確有可能存在的數(shù)值升高因素及數(shù)值降低因素，明確說明對何種條件下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，以及在確認(rèn)試驗(yàn)時(shí)對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述。

12.【檢驗(yàn)方法的局限性】

說明試劑的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)，為達(dá)到診斷目的，此檢測結(jié)果要與臨床檢測、病史和其他檢測結(jié)果結(jié)合使用。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo):

（1）試劑空白吸光度。

（2）分析靈敏度。

（3）準(zhǔn)確度。

（4）精密度（重復(fù)性和批間差）。

（5）線性（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）。

14.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）本試劑僅供體外檢測使用，試劑中含有的化學(xué)成分應(yīng)說明接觸人體后產(chǎn)生的不良影響后果及應(yīng)急處理措施。

（2）采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報(bào)告中注明所用試劑特征（如參考區(qū)間或方法學(xué)）。

（3）有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)校準(zhǔn)品、質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已通過乙型肝炎表面抗原（HbsAg）、人類免疫缺陷病毒抗體（抗-HIV1/2）、丙型肝炎抗體（抗-HCV）等項(xiàng)目的檢測為陰性，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。提示對于潛在傳染源的處理方式。

（4）對于動(dòng)物源性組分，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

（5）樣本：對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

（6）其他有關(guān)胱抑素C檢測的注意事項(xiàng)。

三、審查關(guān)注點(diǎn)

（一）關(guān)注產(chǎn)品預(yù)期用途有關(guān)的描述是否與臨床研究結(jié)論一致。臨床研究用對比試劑和第三方確認(rèn)試劑的預(yù)期用途應(yīng)與申請產(chǎn)品預(yù)期用途一致。申報(bào)樣本類型應(yīng)在臨床研究中進(jìn)行驗(yàn)證。

（二）審查產(chǎn)品技術(shù)要求時(shí)應(yīng)注意產(chǎn)品應(yīng)符合YY/T 1255《免疫比濁法檢測試劑（盒）（透射法）》和YY/T 1230 《胱抑素C測定試劑（盒）》有關(guān)規(guī)定。

（三）說明書中預(yù)期用途、儲存條件及有效期、檢驗(yàn)方法、參考范圍、產(chǎn)品性能指標(biāo)、抗干擾能力等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

四、編寫單位

四川省食品藥品安全監(jiān)測及評審認(rèn)證中心。