附件：視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）注冊審查指導(dǎo)原則（2021年第104號）.doc

視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）注冊審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人（下文簡稱“申請人”）對視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》，本指導(dǎo)原則適用于按第二類醫(yī)療器械管理的視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法），用于檢測人體樣本中視黃醇結(jié)合蛋白的含量，臨床上主要用于肝臟或腎小管損傷性疾病的輔助診斷，產(chǎn)品類別為：Ⅱ-1用于蛋白質(zhì)檢測的試劑，分類編碼為6840。

視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）是指利用免疫比濁法（如免疫透射比濁法、膠乳增強免疫比濁法等）對人血清、血漿或尿液的視黃醇結(jié)合蛋白（Retinol-Binding Protein,下文簡稱“RBP”）進(jìn)行體外定量測定的試劑盒。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

申請人應(yīng)描述試劑（盒）的產(chǎn)品名稱、包裝規(guī)格、主要組成成分、預(yù)期用途、儲存條件及有效期等信息。

1.產(chǎn)品名稱

試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）。

2.包裝規(guī)格

2.1應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規(guī)格一致。

2.2應(yīng)能清晰地描述出試劑盒的構(gòu)成，不得出現(xiàn)試劑盒的組成成分與包裝規(guī)格中描述不一致的情況。

2.3應(yīng)注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××mL。

2.4如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型，則應(yīng)同時明確適用機型。

3.主要組成成分

說明試劑包含主要組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。如果對于正確的操作或使用者理解其用途很重要，應(yīng)詳細(xì)說明。

4.預(yù)期用途

說明試劑盒用于體外定量檢測人體樣本中視黃醇結(jié)合蛋白的含量，應(yīng)明確具體的樣本類型如血清、血漿、尿液等，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。

5.儲存條件及有效期

5.1對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品且其形態(tài)為凍干粉，則應(yīng)對復(fù)溶后的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。如試劑需要配制，則應(yīng)對配制后的試劑的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。

5.2保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。小于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以日或小時為單位，大于或等于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以月為單位。

5.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進(jìn)行描述。

（二）綜述資料

1.綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹、主要原材料研究資料（如需提供）、主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：

1.1產(chǎn)品預(yù)期用途：描述產(chǎn)品的預(yù)期用途、與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，明確樣本類型，如臨床適應(yīng)癥的發(fā)生率、易感人群，相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。用于檢測人體樣本中視黃醇結(jié)合蛋白的含量，臨床上主要用于肝臟或腎小管損傷性疾病的輔助診斷。

1.2產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來源及制備方法、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，主要生產(chǎn)工藝過程及關(guān)鍵控制點，校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的制備方法以及校準(zhǔn)品溯源和質(zhì)控品定值情況（如有）。

1.3有關(guān)生物安全性方面的說明：如試劑主要原材料中含有人源性材料須對有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體檢測情況予以說明，并提供相關(guān)的證明文件。如含有其他動物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)提供相應(yīng)的說明文件，證明其在產(chǎn)品運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境是安全的，并對上述原材料所采用的滅活等試驗方法予以說明。

1.4有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價。

1.5其他：包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況、相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況、申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

2.主要原材料研究資料（如需提供）

2.1主要包括主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實驗驗證研究資料，如抗體、膠乳顆粒等；質(zhì)控品（如包含）、校準(zhǔn)品（如包含）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料；校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、試驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。

應(yīng)詳述試劑盒所用抗體的名稱及生物學(xué)來源，若為申請人自制，應(yīng)提交刺激免疫原名稱及來源（天然或重組）等信息，提交抗體制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗資料。注冊人應(yīng)明確該抗體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等）及確定依據(jù)；若抗體為申請人外購，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述注冊人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求。

2.2其他輔助原材料的選擇及驗證資料，如反應(yīng)緩沖液等，申請人應(yīng)詳述每一主要原輔料性能指標(biāo)的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購，應(yīng)詳述每一主要原輔料的外購方名稱并提交外購方出具的每一主要原輔料性能指標(biāo)及檢驗證書。

2.3企業(yè)內(nèi)部參考品、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的原料選擇、制備、定值過程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實驗驗證研究資料；具體要求可參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 21415《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》、YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》、YY/T 1709《體外診斷試劑用校準(zhǔn)物測量不確定度評定》。

3.主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

3.1主要生產(chǎn)工藝介紹，可以用流程圖方式表示，并標(biāo)明關(guān)鍵控制點，簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)，如各組分制備的工藝、試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定等。申請人應(yīng)采用經(jīng)過驗證，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝。

3.2反應(yīng)原理介紹；

3.3檢測方法的介紹：含樣本采集、校準(zhǔn)方法和質(zhì)控方法、測試步驟、結(jié)果計算等；

3.4反應(yīng)體系研究：含樣本采集及處理、樣本要求（抗凝劑的選擇（如涉及）、樣本穩(wěn)定性包括樣本儲存條件、儲存時間等）、樣本和試劑的用量、反應(yīng)條件（波長、溫度、時間等）、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法等的研究資料；

3.5不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

3.6不同樣本類型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別詳述。

（三）非臨床資料

1.分析性能評估資料

申請人應(yīng)當(dāng)提交在生產(chǎn)質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的不少于三批次的申報試劑進(jìn)行的所有性能評價的研究資料，包括具體的研究項目、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、統(tǒng)計分析、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、配套儀器作為一個整體進(jìn)行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗時間、地點、適用儀器名稱和型號、試劑名稱、規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（名稱、規(guī)格、批號等信息）、臨床樣本類型、來源、濃度及其確定方法、處理方法等，體現(xiàn)結(jié)果數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析過程及結(jié)論。對血清和血漿樣本類型，可進(jìn)行同源比對，對于尿液樣本類型，應(yīng)單獨進(jìn)行分析性能評估。

性能評估應(yīng)至少包括試劑空白吸光度、分析靈敏度、準(zhǔn)確度、線性、精密度、分析特異性及其他影響檢測的因素等。

1.1試劑空白吸光度

用制造商指定的空白樣本重復(fù)測定，次數(shù)不少于2次，記錄試劑盒參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點主波長下的吸光度值（A），結(jié)果均值應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。

注：空白樣本可以是純化水、生理鹽水、零校準(zhǔn)液等。

1.2分析靈敏度

可參照CLSI EP17-A對空白限（LoB）、檢出限（LoD）、定量限（LoQ）進(jìn)行研究。

空白限的建立可使用檢測零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液的方法進(jìn)行。例如重復(fù)測定20次，根據(jù)測量結(jié)果的平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），計算M+2SD及其對應(yīng)的濃度值。

檢出限的確立可采用系列稀釋參考品的方法進(jìn)行。建議使用有證參考物質(zhì)進(jìn)行梯度稀釋并進(jìn)行至少60次檢測，95%以上的檢測結(jié)果高于空白限作為檢出限。另外，應(yīng)使用最低檢出限或接近最低檢出限水平的樣本進(jìn)行檢出限的驗證。

定量限應(yīng)考慮總誤差（偏倚和精密度）的要求。偏倚可通過檢測已知濃度的低水平樣本進(jìn)行估計，例如檢測低水平的有證參考物質(zhì)。如涉及將樣本稀釋至低濃度水平，應(yīng)確保稀釋液不引起基質(zhì)效應(yīng)，且在低濃度區(qū)間呈線性。精密度的估計可根據(jù)檢測試劑及其應(yīng)用確定其影響因素，一般應(yīng)至少包括重復(fù)性和日間精密度。

LoB，LoD，LoQ的研究需選擇多個樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行研究。

1.3準(zhǔn)確度

對測量準(zhǔn)確度的評價依次包括：與參考物質(zhì)的相對偏差、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇以下方法的一項或兩項進(jìn)行研究。優(yōu)先采用與參考物質(zhì)的比對研究。

1.3.1相對偏差

測試可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)3次，測試結(jié)果記為（Xi），按YY/T 1584中的相對偏差計算公式分別計算相對偏差（Bi），如果3次結(jié)果都不超過±15%，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（1）計算相對偏差（Bi），如果大于或等于19次測試的結(jié)果都不超過±15%，即判為合格。

1.3.2比對試驗

用不少于40個在測定濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，采用參考測量程序或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為比較測量程序，每份樣品按待測試劑盒操作方法及比對方法分別檢測。用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（r）及各濃度點（包括醫(yī)學(xué)決定水平處）的相對偏差或絕對偏差，結(jié)果應(yīng)符合以下要求：

1.3.2.1 RBP試劑盒采用的樣本濃度至少覆蓋（10.0，120.0）mg/L區(qū)間；相關(guān)系數(shù)r≥0.975；（10.0，30.0]mg/L的區(qū)間內(nèi)，絕對偏差應(yīng)在±3.0mg/L范圍內(nèi)；（30.0，120.0）mg/L的區(qū)間內(nèi)，相對偏差應(yīng)在±10.0%范圍內(nèi)。

1.3.2.2 URBP試劑盒采用的樣本濃度至少覆蓋（0.2，10.0）mg/L區(qū)間；相關(guān)系數(shù)r≥0.975；（0.2，1.0]mg/L的區(qū)間內(nèi)，絕對偏差應(yīng)在±0.15mg/L范圍內(nèi)；（1.0，10.0）mg/L的區(qū)間內(nèi)，相對偏差應(yīng)在±15.0%范圍內(nèi)。

注：若樣本不穩(wěn)定，一份樣本宜在兩個系統(tǒng)同時進(jìn)行測定。待測系統(tǒng)及參考系統(tǒng)需可比，且滿足各自質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或產(chǎn)品技術(shù)要求后，方可進(jìn)行比對試驗。

1.4線性

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合樣本，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7——11個濃度水平，每個濃度水平重復(fù)測定2——4次。例如將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。

用接近線性范圍上限的高濃度樣本和接近線性范圍下限的低濃度樣本，混合成至少5個稀釋濃度（Xi）。用申報試劑分別測試以上樣本，每個稀釋濃度測試3次，分別求出每個稀釋濃度檢測結(jié)果的均值（Yi）。以稀釋濃度（Xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（Yi）為因變量求出線性回歸方程。計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r），結(jié)果應(yīng)符合以下要求：

1.4.1 RBP試劑盒

申請人應(yīng)該提供RBP試劑盒，線性至少覆蓋（10.0，120.0）mg/L區(qū)間：

線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.990；

（10.0，30.0]mg/L的區(qū)間內(nèi)，絕對偏差應(yīng)在±3.0mg/L范圍內(nèi)；（30.0，120.0）mg/L的區(qū)間內(nèi)，相對偏差應(yīng)在±10.0%范圍內(nèi)。

1.4.2 URBP試劑盒

申請人應(yīng)該提供URBP試劑盒，線性至少覆蓋（0.2，10.0）mg/L區(qū)間：

線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.990；

（0.2，1.0]mg/L的區(qū)間內(nèi)，絕對偏差應(yīng)在±0.15mg/L范圍內(nèi)；（1.0，10.0）mg/L的區(qū)間內(nèi)，相對偏差應(yīng)在±15.0%范圍內(nèi)。

1.5精密度

精密度的評價包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性內(nèi)容，評價時充分考慮影響精密度的條件：如操作者、測量儀器、測量程序、試劑批次（lot）、校準(zhǔn)（校準(zhǔn)品批次，校準(zhǔn)周期）、運行（run）、時間、地點、環(huán)境條件（實驗室溫度、濕度、空氣質(zhì)量、管理等）等。精密度研究中應(yīng)至少進(jìn)行重復(fù)性、日間精密度和批間差的研究。精密度研究用樣本一般為臨床實際檢測樣本或其混合物，必要時可進(jìn)行稀釋、添加或采用基質(zhì)合理的質(zhì)控品。樣本濃度一般包括測量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個水平，應(yīng)有醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上、下限濃度附近的樣本。精密度研究可能涉及多天、多地點檢測，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。

1.5.1重復(fù)性

在重復(fù)性條件下，用試劑盒測試不同濃度的樣本，重復(fù)測試10次，計算10次測試結(jié)果的平均值（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（S），根據(jù)YY/T 1584中的重復(fù)性計算公式得出變異系數(shù)（CV），結(jié)果均應(yīng)符合變異系數(shù)（CV）不大于10%的要求。

1.5.2批間差

用3個不同批號的試劑盒分別測試不同濃度的樣本，每個批號重復(fù)測試3次，分別計算每批3次測試的均值Xi（i=1,2,3）根據(jù)YY/T 1584中的批間差計算公式計算相對極差（R），不同濃度樣本測試結(jié)果均應(yīng)符合批間相對極差（R）不大于15%的要求。

1.5.3日間精密度

在室內(nèi)質(zhì)控在控情況下，依據(jù)CLSIEP5-A2文件對RBP試劑盒的日間精密度進(jìn)行評價。要求由同一（組）操作員在同一環(huán)境條件中，使用同一儀器，同一方法和同一批號試劑，對同一測試樣本（通常采用校準(zhǔn)品）每天重復(fù)測試2次，取均值記為（Xi），記錄20天的測試結(jié)果，根據(jù)式（1）、（2）計算日間精密度變異系數(shù)（CV），結(jié)果應(yīng)符合日間精密度變異系數(shù)（CV）不大于10%的要求。

式中：

B——日間變異估計值；

Xi——第i天的測試結(jié)果均值；

Xi——i天內(nèi)測試結(jié)果的總均值；

CV——日間變異系數(shù)。

1.6分析特異性

1.6.1交叉反應(yīng)

對易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體等進(jìn)行驗證，如前白蛋白、視黃醇等，交叉反應(yīng)驗證物質(zhì)的濃度應(yīng)涵蓋人體生理及病理狀態(tài)下及臨床治療過程中可能出現(xiàn)的最高濃度值，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區(qū)間附近樣本中的方式進(jìn)行驗證。

1.6.2干擾物質(zhì)

應(yīng)針對不同樣本類型，分別評價可能存在的干擾情況，干擾物質(zhì)濃度的分布需覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，如無法獲得含有高濃度干擾物質(zhì)的樣本，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上、下限附近樣本的方式進(jìn)行驗證，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)濃度。建議采用至少兩個分析物水平的樣本進(jìn)行評價，可為臨近醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上下限以及病理水平。

申請人應(yīng)描述清楚抗原是否是天然抗原或重組抗原，若為天然抗原，應(yīng)對前白蛋白及視黃醇是否干擾檢測進(jìn)行驗證，不建議采用采用重組抗原進(jìn)行干擾性研究。

1.6.2.1血清或血漿中的干擾物質(zhì)

應(yīng)評價血清或血漿樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如甘油三酯、膽紅素（游離、結(jié)合）、血紅蛋白、類風(fēng)濕因子、抗核抗體、人抗鼠抗體（Human Antimouse Antibody，HAMA）、其他疾病相關(guān)蛋白及患者體內(nèi)的異常生化代謝物等干擾因子的研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重的模糊表述）。

1.6.2.2尿液中的干擾物質(zhì)

尿液樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如白蛋白、尿素、亞硝酸鹽、pH值的研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重的模糊表述）。

1.6.3藥物影響（如適用）

常見相關(guān)治療藥物對檢測結(jié)果的影響。

1.6.4抗凝劑的影響

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)研究抗凝劑對檢測結(jié)果的影響。如乙二胺四乙酸鹽、肝素、枸櫞酸鹽等，結(jié)果應(yīng)量化表示。應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進(jìn)行對比實驗研究。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一個體的血清和血漿樣本，應(yīng)包含參考區(qū)間上下限附近樣本進(jìn)行檢測以驗證申報試劑對于血清和血漿樣本檢測結(jié)果的一致性。樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

1.7校準(zhǔn)品溯源、質(zhì)控品定值以及性能驗證（如有）

應(yīng)提供校準(zhǔn)品詳細(xì)的賦值溯源資料，包括賦值試驗資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的量值溯源資料的要求，可參照GB/T 21415《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》進(jìn)行詳述。應(yīng)提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品賦值及不確定度計算程序與記錄，提供質(zhì)控品定值及其靶值范圍確定的資料。

校準(zhǔn)品的研究資料應(yīng)按照YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》的要求進(jìn)行性能驗證。

質(zhì)控品的研究資料應(yīng)按照YY/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》的要求進(jìn)行性能驗證。

如試劑盒中不包括校準(zhǔn)品，應(yīng)說明所適配校準(zhǔn)品的制造商和批號，同時提供相應(yīng)的溯源信息。

1.8鉤狀（Hook）效應(yīng)（如有）

說明不會產(chǎn)生Hook效應(yīng)的濃度上限及相關(guān)研究，建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。

研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。

1.9最大可稀釋倍數(shù)（如有）

如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例，并提供相關(guān)的驗證資料。

1.10其他需注意問題

對于適用多個機型的產(chǎn)品，注冊申請時應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。

若注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需對不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

2.參考區(qū)間確定資料

應(yīng)當(dāng)詳細(xì)說明參考區(qū)間確定的方法或依據(jù)，提交建立或驗證參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。如不同性別或不同年齡段的參考區(qū)間不同，應(yīng)進(jìn)行分組研究，保證建立單個參考區(qū)間的樣本數(shù)量符合統(tǒng)計學(xué)要求，不同類型的樣本如血清和尿液的參考區(qū)間應(yīng)分別制定。

若引用針對中國人群參考區(qū)間研究的相關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)明確說明出處，并采用一定數(shù)量的臨床樣本對該參考區(qū)間進(jìn)行驗證。驗證樣本應(yīng)考慮不同年齡、性別因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。參考區(qū)間研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進(jìn)行相應(yīng)說明。

3.穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及以下幾部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性研究、適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑穩(wěn)定性：主要包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（如適用）、開瓶穩(wěn)定性（包括機載穩(wěn)定性）、凍融次數(shù)限制（如適用）等。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批次產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料，并應(yīng)當(dāng)充分考慮產(chǎn)品在儲存、運輸和使用過程中的不利條件，進(jìn)行相應(yīng)的穩(wěn)定性研究。研究資料包括研究方法的確定依據(jù)、研究目的、實施方案、評價標(biāo)準(zhǔn)、研究數(shù)據(jù)和研究結(jié)論等。

樣本的穩(wěn)定性：室溫保存、冷藏或冷凍條件下的有效期驗證，復(fù)溶要求驗證，適用冷凍保存的樣本應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行研究評價。

如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，可參考YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》、YY/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》標(biāo)準(zhǔn)要求，提供相應(yīng)穩(wěn)定性研究資料。

試劑（含校準(zhǔn)品和質(zhì)控品）穩(wěn)定性、樣本穩(wěn)定性的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。

4.產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

風(fēng)險分析應(yīng)包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：預(yù)期用途錯誤包括：設(shè)計開始時未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯誤、采購的原料未能達(dá)到設(shè)計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容。可能的使用錯誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組份、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

5.產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗方法。

產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：

GB/T 21415體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性

GB/T 26124臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）

YY/T 1584視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）

作為定量檢測試劑，應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、空白吸光度、分析靈敏度、準(zhǔn)確度、線性范圍、精密度。各項性能指標(biāo)可參考YY/T 1584《視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）》的要求，如有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布或更新，則產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于其相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

此外，可根據(jù)實際情況增加下列檢驗項目：

校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如有）

校準(zhǔn)品參考YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》、質(zhì)控品參考YY/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》相關(guān)技術(shù)要求。

（四）臨床評價資料

根據(jù)《免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑目錄》，“用于檢測人體樣本中視黃醇結(jié)合蛋白的含量，臨床上主要用于肝臟或腎小球損傷性疾病的輔助診斷”的視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法），可免于進(jìn)行臨床試驗，申請人應(yīng)按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則》提交臨床評價資料。

如無法按要求進(jìn)行臨床評價，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗；如預(yù)期用途超出豁免目錄中的描述，也應(yīng)進(jìn)行臨床試驗。臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。注冊申請人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本比例應(yīng)不低于試驗總量的30%，樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋試驗用體外診斷試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

試驗中，盡可能使用新鮮樣本，如需貯存，應(yīng)明確貯存條件及能否凍融；血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。

評價用的樣本類型應(yīng)與注冊申請保持一致。對于不具有可比性的不同樣本類型，如血液樣本和尿液樣本，應(yīng)分別進(jìn)行符合統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的評估。對于具有可比性的不同樣本類型，如血清和血漿樣本，可在分析性能評估中對樣本適用性進(jìn)行研究，或在臨床評價中對每種樣本類型分別進(jìn)行符合統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的評估。

（五）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、檢驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》、《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》的要求，下面對視黃醇結(jié)合蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

1.1試劑（盒）通用名稱保持與注冊申請表一致。

1.2英文名稱應(yīng)當(dāng)正確、完整、直譯，不宜只寫縮寫。（如有）

2.【包裝規(guī)格】

應(yīng)保持與注冊申請表一致。

3.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1第一段內(nèi)容保持與注冊申請表一致

3.2第二段內(nèi)容說明臨床意義是反映被檢者肝臟或腎小管損傷性疾病的輔助診斷。

4.【檢驗原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢驗原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述：

如：將視黃醇結(jié)合蛋白（RBP）抗體偶聯(lián)在膠乳微球上，當(dāng)遇到 RBP抗原時，抗原抗體結(jié)合，也使偶聯(lián)了 RBP的抗體膠乳顆粒發(fā)生凝集使透射光減少，這種減少的程度與膠乳顆粒凝集的程度成正反應(yīng)，且與視黃醇結(jié)合蛋白含量成正反應(yīng)，通過校準(zhǔn)曲線，可計算出樣品中RBP的含量。

5.【主要組成成分】

主要組成成分的描述應(yīng)保持與注冊申請表一致。

應(yīng)說明工作液的主要組成成分。對于多組分試劑盒，應(yīng)明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品也應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)說明，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。如校準(zhǔn)品定值或質(zhì)控品靶值范圍為批特異，應(yīng)注明批特異，并附單獨的靶值單或在相應(yīng)組分瓶標(biāo)簽明示靶值。如試劑盒不帶校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，應(yīng)推薦適用的已上市校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（且應(yīng)與注冊提交的相關(guān)研究資料保持一致）。

對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗必需的組分，說明書中應(yīng)列出此類試劑的名稱、提供混合或稀釋等方法及其他相關(guān)信息。

6.【儲存條件及有效期】

6.1試劑（盒）的儲存條件及有效期應(yīng)保持與注冊申請表一致。

6.2注明生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期（可見標(biāo)簽）。

7.【適用機型】

注明所適用的儀器類型，應(yīng)細(xì)化到型號。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以指導(dǎo)用戶操作。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件、運輸條件等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，可凍融次數(shù)。應(yīng)對已知的干擾物進(jìn)行說明，如：存在的干擾因素，明確甘油三酯、膽紅素（游離、結(jié)合）、血紅蛋白、藥物等干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。

9.【檢驗方法】

詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制方法（如有）、注意事項。

9.2詳細(xì)描述樣本的檢測前處理方法。

9.3試驗條件：溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項。

9.4應(yīng)說明校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、推薦的校準(zhǔn)周期，以及何種情況須重新校準(zhǔn)。

9.5應(yīng)說明質(zhì)控品的使用方法、注意事項、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

10.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明適用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明其確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

應(yīng)根據(jù)其臨床意義對可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。

說明試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查等情況綜合考慮。

說明在何種情況下應(yīng)對樣本進(jìn)行重復(fù)測試，以及在重復(fù)測試時需要采取的樣本處理方式。

12.【檢驗方法的局限性】

（1）干擾物質(zhì)及HOOK效應(yīng)對檢測結(jié)果的影響。

（2）操作時必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程，對操作程序作任何修改都可能影響結(jié)果。

某些未知成分屏蔽了抗原決定簇使之無法與抗體結(jié)合；RBP蛋白隨著樣本儲存條件不滿足而導(dǎo)致逐漸降解無法被抗體識別；不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運及處理、樣本中被測物質(zhì)濃度過低等均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

（3）強調(diào)當(dāng)檢測結(jié)果超出線性范圍時是否適用稀釋檢測的處理方式。如不適用，應(yīng)說明。如適用，說明最大稀釋倍數(shù)。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

申請人應(yīng)按產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)，說明該產(chǎn)品主要性能指標(biāo)，應(yīng)至少包括以下部分，并根據(jù)樣本類型分別制定：

（1）試劑空白吸光度；

（2）空白限

（3）分析靈敏度；

（4）線性范圍（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）；

（5）精密度（重復(fù)性、批間差）；

（6）準(zhǔn)確度；

（7）校準(zhǔn)品性能指標(biāo)（如有）；

（8）質(zhì)控品性能指標(biāo)（如有）；

（9）特異性

（10）鉤狀效應(yīng)

14.【注意事項】

應(yīng)包括以下內(nèi)容：

14.1本試劑盒僅供體外檢測使用，試劑中含有的化學(xué)成分應(yīng)說明接觸人體后產(chǎn)生的不良影響后果及應(yīng)急處理措施。

14.2采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。

14.3有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.4對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

14.5其他需要說明的注意事項。

15.【標(biāo)識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻(xiàn)】

注明引用參考文獻(xiàn)，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一。

17.【基本信息】

17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊申請人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息：注冊申請人/生產(chǎn)企業(yè)名稱、住所、聯(lián)系方式、售后服務(wù)單位名稱、聯(lián)系方式、生產(chǎn)地址、生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊申請人名稱、住所、聯(lián)系方式、售后服務(wù)單位名稱、聯(lián)系方式、受托企業(yè)的名稱、住所、生產(chǎn)地址、生產(chǎn)許可證編號。

17.2進(jìn)口體外診斷試劑

按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊申請人/生產(chǎn)企業(yè)名稱、住所、生產(chǎn)地址、聯(lián)系方式、售后服務(wù)單位名稱、聯(lián)系方式、代理人的名稱、住所、聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。

19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】

應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進(jìn)行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、參考文獻(xiàn)

[1]黃小明,張春榮.視黃醇結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展述評[J].臨床合理用藥,2017,10（1）:176-177.

[2]梁學(xué)穎,徐琪壽.視黃醇結(jié)合蛋白的分子生物學(xué)[J].生理科學(xué)進(jìn)展,2000,31（3）：277-279.

[3]蔣最明,顧敏,李仲余.血清視黃醇結(jié)合蛋白在腎病早期診斷中的應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2011,8（19）：2344-2346.

[4]梁棟偉,陳斌鴻.血清視黃醇結(jié)合蛋白和前白蛋白在肝病診斷中的應(yīng)用[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報,2007,（15）:127-128+126.

[5]賴子飛.尿視黃醇結(jié)合蛋白在腎臟病中的檢測及評價[J].海南醫(yī)藥，2011，22（23）：34-35.

四、編寫單位

湖南省藥品審評與不良反應(yīng)監(jiān)測中心