附件：腫瘤標志物類定量檢測試劑注冊申報資料指導原則（食藥監(jiān)辦械函[2011]116號）.doc

腫瘤標志物類定量檢測試劑注冊申報資料指導原則
（食藥監(jiān)辦械函[2011]116號）

一、前言

本指導原則旨在指導注冊申請人對腫瘤標志物類定量檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導原則是對腫瘤標志物類定量檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化，并依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內(nèi)容也將進行適時調(diào)整。

二、適用范圍

腫瘤標志物類定量檢測試劑是指利用各種方法學對人血清、血漿或其他體液中的腫瘤標志物進行體外定量分析的試劑。本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

從方法學考慮，本文主要指利用基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學方法對腫瘤標志物進行定量檢測的體外診斷試劑，如酶免疫法、化學發(fā)光法或微粒子酶免法等（不限于上述方法學），而不包括組織受體檢測、生物化學方法、免疫組化染色法、分子生物學方法類檢測試劑，有利之處可參考執(zhí)行。

三、基本要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》（國食藥監(jiān)械〔2007〕609號）的相關(guān)要求，下面著重介紹與腫瘤標志物類定量檢測試劑預(yù)期用途有關(guān)的臨床背景情況。

理想的腫瘤標志物應(yīng)具有以下特性：靈敏度高，便于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)；特異性好，便于良、惡性腫瘤的鑒別；良好的器官特異性；與病情嚴重程度、腫瘤大小或分期有直接關(guān)系；監(jiān)測治療效果，腫瘤標志物濃度增高或降低與治療效果相關(guān)；預(yù)測復發(fā)，疾病復發(fā)時腫瘤標志物水平明顯異常。但至今尚沒有一種腫瘤標志物能完全滿足上述要求。目前，臨床常用腫瘤標志物在用于惡性腫瘤的臨床診治時,靈敏度和特異性都不高，絕大多數(shù)腫瘤標志物的濃度高低與腫瘤的大小、生長、惡性程度以及分級/分期有一定關(guān)聯(lián)但尚不能作為早期診斷或確診的依據(jù)。

腫瘤標志物主要用于惡性腫瘤患者病情的動態(tài)監(jiān)測，不能作為早期診斷或確診依據(jù)，尚無足夠證據(jù)證明其可用于普通人群的腫瘤篩查。其濃度逐漸升高常意味著疾病處于不斷進展期或療效不佳，濃度降低則意味著對治療有反應(yīng)或療效較好，而穩(wěn)定的抗原水平則常常暗示疾病處于穩(wěn)定期。動態(tài)監(jiān)測的另一目的是判斷殘留病灶、預(yù)測復發(fā)，腫瘤標志物濃度持續(xù)低水平地高于正常意味著可能有殘留病灶的存在，而短期內(nèi)迅速升高則往往是疾病復發(fā)的前兆。由于目前應(yīng)用的腫瘤標志物不能完全區(qū)分良惡性疾病，即使?jié)舛鹊陀谡⒖贾狄膊⒉荒芘懦龕盒约膊〉目赡苄?，而在許多良性疾病卻可見這些標記物濃度水平的升高，故在對惡性腫瘤患者的臨床診治中，應(yīng)結(jié)合患者的癥狀/體征、其他實驗室檢測以及治療情況等綜合考慮。

（二）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，下面對腫瘤標志物類定量檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）說明試劑盒用于定量檢測血清、血漿和/或其他體液中的某腫瘤標志物濃度；

（2）簡單介紹該腫瘤標志物的特征，如分子結(jié)構(gòu)、分子量、產(chǎn)生和代謝主要途徑、半衰期等；

（3）腫瘤標志物水平升高常見于哪些良惡性疾病，組織/器官特異性如何，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學解釋；

（4）強調(diào)：主要用于對惡性腫瘤患者進行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進程或治療效果，不能作為惡性腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，不宜用于普通人群的腫瘤篩查。

2.【主要組成成分】

（1）說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，如果對于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學來源、活性及其他特性；明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

（2）試劑盒內(nèi)如包含校準品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學來源，校準品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的靶值范圍。

（3）試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。

3.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限、保存條件（短期、長期）、運輸條件等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，凍融次數(shù)。應(yīng)詳細描述對特殊體液標本的采集條件、保存液、容器等可能影響檢測結(jié)果的要求。

4.【適用機型】注明所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導用戶操作。

5.【檢驗方法】詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

（1）試劑配制方法、注意事項。

（2）試驗條件：溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項。

（3）校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。對需專用儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明推薦的儀器校準周期。

（4）質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報告。如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

6.【產(chǎn)品性能指標】詳述以下性能指標：

（1）最低檢出限（分析靈敏度）：說明試劑的最低檢出濃度或不高于某濃度水平，簡單介紹確定方法，對功能靈敏度如有研究可一并注明。

（2）檢測范圍：本試劑盒可達到的線性范圍、檢測范圍或可報告范圍，儀器報告結(jié)果的高限和低限要求（如有）等。

（3）精密度：簡要說明精密度評價的方法，建議以列表的方式列出批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、運行內(nèi)/運行間精密度等信息，以標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）的形式表示。

（4）特異性：有關(guān)干擾或交叉反應(yīng)的研究。常見的特異性研究包括：對溶血、高脂、黃疸等干擾因子研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴重等模糊表述），有關(guān)自身抗體、易共存或結(jié)構(gòu)相似的不同腫瘤標志物間、抗腫瘤藥物特異性（如某些生物制劑）的研究，如未進行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。

（5）Hook（鉤狀）效應(yīng)：說明不會產(chǎn)生Hook效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。

（6）對比試驗研究（如有）：簡要介紹參比試劑的信息、所采用的統(tǒng)計學方法等，對比結(jié)果可以回歸方程、判定系數(shù)的形式表示。

（7）建議采用國際標準濃度單位表示腫瘤標志物濃度，如涉及不同單位，如U/ml、ng/ml、mg/l等，應(yīng)注明不同單位間的換算關(guān)系。

7.【參考值（范圍）】

應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

8.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

（2）由于方法學或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行腫瘤標記物檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此，在腫瘤監(jiān)測過程中，用不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中如果改變試劑類型，則應(yīng)進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線值。

（3）有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

（4）樣本：采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

（5）其他有關(guān)不同腫瘤標志物特性的注意事項。

（三）擬定產(chǎn)品標準及編制說明

擬定產(chǎn)品標準應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。另外，對于國產(chǎn)第三類體外診斷試劑產(chǎn)品，應(yīng)參考《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），將擬申報產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標準正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項中引出該附錄內(nèi)容。

作為定量檢測試劑，腫瘤標志物產(chǎn)品的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標：準確度、精密度、最低檢測限（分析靈敏度）、線性范圍等。如果擬申報試劑屬于《中國生物制品規(guī)程》（2000年版）收錄的項目或已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標準發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。

（四）注冊檢測

根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理局認可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。對于已經(jīng)有國家標準品的腫瘤標志物項目，在注冊檢測時應(yīng)采用相應(yīng)的國家標準品進行,對于目前尚無國家標準品的項目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的標準體系并提供相應(yīng)的標準品。

（五）主要原材料研究資料

主要原材料（包括抗原、抗體及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標準及實驗驗證研究資料；質(zhì)控品、校準品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料；校準品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細資料。

（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示；

2.反應(yīng)原理（如雙抗體夾心法）介紹；

3.固相載體、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹；

4.確定抗原抗體反應(yīng)條件（溫度、時間、pH值等）的研究資料；

5.確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量（校準品、樣本、包被物、酶標物、底物等）的研究資料；

6.酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究；

7.其他：如清洗次數(shù)、基質(zhì)液的選擇、樣本稀釋等；

8.不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（七）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。對于腫瘤標志物類定量檢測試劑，建議著重對以下分析性能進行研究。

1.準確度

對測量準確度的評價依次包括：與國家標準品（和/或國際標準品）的偏差分析、回收實驗、方法學比對等方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

（1）與國家（國際）標準品的比對研究

如果研究項目有相應(yīng)國家（國際）標準品，則使用國家（國際）標準品進行驗證，重點觀察對相應(yīng)標準品檢測結(jié)果的偏差情況。

（2）回收試驗

用于評估定量檢測方法準確測定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對樣本進行2-3次回收試驗，取平均值即平均回收率。

回收試驗注意事項：

①加入的標準液體積一般應(yīng)小于樣本體積的10%；

②盡量使加入標準液后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學決定水平；

③標準物濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；

④注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質(zhì)。

（3）方法學比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學分析。

2.精密度

測量精密度的評估應(yīng)至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學決定水平），通常選用該檢測指標的正常參考值（范圍）附近和異常高值樣本。兩個濃度都選用高值樣品，可能致CV偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能致CV偏大，而且絕大多數(shù)腫瘤標志物的極低值并無實際臨床意義。

測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征或企業(yè)的研究習慣進行，前提是必須保證研究的科學合理性。具體實驗方法可以參考相關(guān)的CLSI-EP文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

3.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7-11個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。

4.最低檢測限（分析靈敏度）

最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準品（或樣品稀釋液）進行至少20次重復檢測，平均值加（或減）2倍SD（≥95%置信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。

5.特異性

（1）溶血（血紅蛋白）、高脂、高膽紅素等干擾因素對檢測結(jié)果的影響及相關(guān)干擾因子的高限值。

（2）自身抗體影響，如RF、ANA等。

（3）樣本中存在的某些與待測抗原有相似化學結(jié)構(gòu)或抗原表位的分子，可能與試劑中的單克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)而影響檢測結(jié)果，如易共存的其他腫瘤標志物抗原、某些激素、近期使用的抗腫瘤藥物、人抗鼠抗體（HAMA）等。

6.高濃度Hook效應(yīng)及樣本稀釋

Hook效應(yīng)通常指在雙抗體夾心實驗中，由于標本中受檢抗原的含量過高，過量抗原分別與固相抗體和酶標抗體結(jié)合，而不再形成“夾心復合物”，從而影響檢測結(jié)果，將高濃度錯誤報告為低濃度，出現(xiàn)高濃度后帶現(xiàn)象，又稱“鉤狀效應(yīng)”，在一步法操作更常見。

企業(yè)應(yīng)對一些極高值樣本進行相關(guān)研究，以驗證產(chǎn)生Hook效應(yīng)的高限值。過度稀釋可能產(chǎn)生明顯的基質(zhì)效應(yīng)，企業(yè)應(yīng)對樣本稀釋液、合理的稀釋比例做相關(guān)研究以確認最佳稀釋條件。

7.其他需注意問題

對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。

試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進行相關(guān)性研究以確認二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。對于血漿樣本，企業(yè)應(yīng)對不同的抗凝劑進行研究以確認最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結(jié)果。

（八）參考值（范圍）確定資料

參考值（范圍）確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料。建議采用受試者工作特征（ROC）曲線方法確定擬申報腫瘤標志物的參考值（范圍）。

（九）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、上機穩(wěn)定性及開瓶（復溶）穩(wěn)定性等，企業(yè)可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

（十）臨床試驗研究

1.研究方法

（1）已有同類產(chǎn)品上市的臨床研究

選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。

（2）新腫瘤標志物檢測試劑的臨床研究

對于無法選擇參比試劑的新腫瘤標記物而言，其臨床研究應(yīng)選擇多個相關(guān)的良惡性疾病組及部分正常人群，驗證新標記物的臨床靈敏度和特異性，并利用ROC曲線確定合適的參考值（范圍）。另外，還應(yīng)對至少100例特定的惡性腫瘤患者進行治療前后的隨訪監(jiān)測研究，以驗證新腫瘤標記物濃度變化與患者病情變化的相關(guān)性。臨床隨訪監(jiān)測研究應(yīng)結(jié)合臨床治療措施的選擇（公認有效的治療手段）、患者治療后恢復狀況、腫瘤標志物代謝周期（半衰期）等因素綜合考慮?；颊卟蓸拥臅r間點視臨床需要而定，申請人不得隨意干涉。

2.臨床研究單位的選擇

建議在國內(nèi)不同城市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性；臨床研究單位應(yīng)具有腫瘤疾病診療的優(yōu)勢，實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設(shè)計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。對于新試劑的動態(tài)監(jiān)測研究，應(yīng)在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標準。臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計學要求。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應(yīng)完全一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。

4.臨床病例選擇

如上文所述，絕大多數(shù)腫瘤標志物對于惡性腫瘤診斷的靈敏度和特異性較低，器官定位及對疾病良惡性的區(qū)分能力都較差。因此，在進行臨床研究時，除選擇目的器官/組織惡性疾病的病例外，還應(yīng)選擇其他器官/組織的惡性病患者、相關(guān)的良性病例等。另外，孕婦或處于生理周期女性亦可見某些激素或胚胎蛋白類腫瘤標志物的水平升高，對于此類腫瘤標志物，臨床研究中應(yīng)選擇部分相關(guān)樣本作為受試對象。

臨床研究應(yīng)包括對部分來自正常健康人群的樣本作為正常對照。比較正常組和疾病組結(jié)果，以便對申報產(chǎn)品的臨床性能做出全面分析。建議對健康人群例數(shù)的選擇以不超過150例為宜。對于新的腫瘤標志物或臨床意義有待進一步明確的項目，應(yīng)提供足夠臨床證據(jù)證明其臨床預(yù)期用途。不管是健康人群或不同病種的患者，每一組受試者的最小入選人數(shù)均須滿足統(tǒng)計學分析的基本要求。

另外，建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的標本進行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本，RF、ANA陽性樣本，易共存的其他腫瘤標志物抗原同時升高的患者標本，以從臨床角度驗證試劑的特異性。

5.統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、受試者工作特征（ROC）曲線分析、陰/陽性符合率等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R²;）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用臨床上普遍認為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進行驗證試驗，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

（1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

②病例納入/排除標準、不同病種的預(yù)期選擇例數(shù)及健康人群的選擇標準；

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

④統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。

（2）具體的臨床試驗情況

①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

②對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

③質(zhì)量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；

④具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

（3）統(tǒng)計學分析

①數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②定性結(jié)果的一致性分析

陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。以交叉表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，對定性結(jié)果進行四格表卡方或kappa檢驗以驗證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。

③定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R²的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R²是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學差異。

另外考慮到在不同的樣本濃度區(qū)間試劑的性能可能存在一定差異，因此，建議對總體濃度范圍進行區(qū)間分層統(tǒng)計，對不同濃度區(qū)間內(nèi)的結(jié)果進行相關(guān)性分析以更好的驗證兩種試劑的相關(guān)性。

對新腫瘤標志物系列監(jiān)測研究，建議按照患者治療后病情狀況進行逐級分組，并確定分組的臨床診斷標準，對各組數(shù)據(jù)分別進行統(tǒng)計學處理，判斷被觀察腫瘤標志物的濃度隨疾病狀況的變化情況。

（4）討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

四、名詞解釋

1.腫瘤標志物（TumorMarker）：是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過程中,由腫瘤細胞產(chǎn)生或機體反應(yīng)而異常產(chǎn)生和/或升高的，反映腫瘤細胞特性的一類物質(zhì)。

2.準確度（accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

3.最低檢測限/分析靈敏度（Lowerdetectionlimit）：樣品中以一定概率可被聲明與零有差異的被測量的最低值。本指導原則中的最低檢測限為區(qū)別于零的不低于95%可信區(qū)間的最低濃度。

4.分析特異性（analyticalSpecificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物）

5.線性（linearity）：在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

6.精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

五、參考文獻：

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（國食藥監(jiān)械[2007]229號）

2.《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

4.GuidanceDocumentfortheSubmissionofTumorAssociatedAntigenPremarketNotifications,[510（k）],toFDA，F(xiàn)DA,USASetember19,1996.

5.PracticeGuidelinesandRecommendationsforUseofTumorMarkersintheClinic，theNationalAcademyofClinicalBiochemistry,EuropeanGrouponTumorMarker,Volume15，2002.

6.馮仁豐，《臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》（第二版），上?？茖W技術(shù)文獻出版社

7.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學工業(yè)出版社